熒光定量PCR檢測

▏ 服務原理及背景

實時熒光定量PCR在檢測體系中加入熒光基團，通過PCR 擴增反應中每一個循環(huán)產物熒光信號的實時檢測，從而實現對起始模板的定量及定性分析。隨著PCR反應的不斷進行，帶熒光的PCR產物逐步累積，信號強度等比例增強。這樣，我們可以通過熒光信號的變化來實時監(jiān)控PCR產物量的變化，得到一條擴增曲線。
實時熒光定量PCR擴增曲線有基線期、指數期和平臺期各階段。
基線期，熒光信號基本為背景信號，無法辨別產物的熒光信號值；
指數期，熒光信號超過背景信號進入指數增長階段的閾值，此時循環(huán)數稱為 Ct ( Cycle threshold) 值，PCR模板起始濃度的對數值與Ct呈線性關系。
平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加，最終的 PCR產物量不能計算出起始模板拷貝數。

▏ 檢測方法

定量方法包括絕對定量分析和相對定量分析，采用SYBR Green I法和Taqman探針法。
絕對定量分析：絕對定量法也稱作標準曲線法，是一種利用已知的標準曲線來定量未知樣本目的模板起始量的方法。以 5-6 個點梯度稀釋所得的標準品（科佰可以提供大量驗證過的標準品）為模板，經實時熒光定量 PCR 擴增，以目的模板初始拷貝數的對數為橫坐標，檢測到的 CT 值為縱坐標繪制標準曲線，得到線性回歸方程，將未知樣本的 CT值帶入該方程即可計算出目的模板的起始量。
相對定量分析：相對定量可分析某一靶基因在不同樣品之間、同一樣品的不同部位之間以及某一樣品的某一部位在不同動態(tài)時期之間的 mRNA 水平上表達量的比值，也可分析靶基因與內參基因在同一樣品中拷貝數的比值。

▏ 應用領域

實時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強、快速高效的特點，廣泛應用于生物醫(yī)藥、臨床診斷、農業(yè)、環(huán)境科學等多個領域，常用于檢測基因表達、基因變異、轉基因等。

▏ 服務流程

科佰生物已通過ISO9001和ISO13485雙體系認證，同時將按照CNAS體系要求來執(zhí)行QPCR檢測的各流程，質量有保證。

▏ 案例展示

案例一 新冠病毒（SARS-CoV-2）檢測
應用描述：qPCR被廣泛應用于新冠病毒的核酸檢測，作為診斷的金標準。
技術細節(jié)：針對病毒RNA的特定區(qū)域（如ORF1ab、N基因等）設計引物和探針，通過逆轉錄qPCR（RT-qPCR）檢測病毒RNA。
優(yōu)勢：高靈敏度、高特異性，可快速獲得檢測結果，支持大規(guī)模篩查。

案例二 轉基因作物檢測
應用描述：qPCR用于檢測食品或農產品中是否存在轉基因成分（如轉基因大豆、玉米）
技術細節(jié)：提取腫瘤組織RNA，逆轉錄為cDNA后，使用qPCR檢測特定基因的表達量。
優(yōu)勢：高精度定量，可用于個性化醫(yī)療和治療方案的優(yōu)化。

案例三 乳腺癌基因表達分析
應用描述：通過qPCR檢測乳腺癌相關基因（如BRCA1、HER2）的表達水平，評估患者的治療反應和預后。
技術細節(jié)：針對轉基因作物特定的外源基因序列（如35S啟動子、NOS終止子）設計引物和探針，進行定量檢測。
優(yōu)勢：快速、準確，滿足食品安全監(jiān)管需求。

案例四 腸道菌群定量分析
應用描述：qPCR用于定量分析腸道微生物組中特定菌群的豐度（如乳酸菌、雙歧桿菌）
技術細節(jié)：設計菌群特異性的16S rRNA基因引物和探針，進行定量檢測。
優(yōu)勢：高靈敏度，可精確分析微生物群落結構變化。

案例五 白血病BCR-ABL1標準品開發(fā)
應用描述：qPCR用于定量分析比較不同占比的BCR-ABL1標準品
技術細節(jié)：設計BCR-ABL1的融合基因引物和探針，進行定量檢測。
優(yōu)勢：高靈敏度，可精確分析低頻比例的變化。